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PCR實驗室規(guī)劃設計裝修

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1 、PCR實驗室平面布局 

     PCR擴增檢驗實驗室原則上分為四個單獨的工作區(qū)域:試劑貯存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增反應混合物配制和擴增區(qū)、擴增產物分析區(qū)。為避免交叉污染,進入各個工作區(qū)域必須嚴格遵循單一方向進行,即只能從試劑貯存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增反應混合物配制和擴增區(qū)→擴增產物分析區(qū)。 各實驗區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應通過傳遞窗進行。
2、實驗室空調通風系統(tǒng)設計及壓力控制 

     PCR實驗室并沒有嚴格的凈化要求,但是為避免各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式。同時,要嚴格控制送、排風的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求。 

2.1、試劑貯存和準備區(qū)

    該實驗區(qū)主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應直接運送至該區(qū),不得經過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內,并在本區(qū)內制備成所需的貯存試劑。 對與氣流壓力的控制,本區(qū)并沒有嚴格的要求。 

2.2、標本制備區(qū) 

    該區(qū)域主要進行的操作為樣本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。 本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為正壓,以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。另外,由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染,所以應避免在本區(qū)內不必要的走動。 

2.3、擴增反應混合物配制和擴增區(qū) 

    該區(qū)域主要進行的操作為DNA擴增。此外,已制備的DNA模板 (來自樣本制備區(qū))的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應混合液等也可在本區(qū)內進行。 本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染,應盡量減少在本區(qū)內的不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內進行。 

2.4、擴增產物分析區(qū) 

    該區(qū)域主要進行的操作為擴增片段的測定。 本區(qū)是最主要的擴增產物污染來源,因此對本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓,以避免擴增產物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域。


3、污染的預防與控制 

      PCR實驗室設計的核心問題是如何避免污染。在實際工作中,常見的有以下幾種污染類型:擴增產物的污染;天然基因組DNA的污染;試劑的污染以及標本間的污染。由于一旦發(fā)生污染,實驗就必須停止,直到找到污染源為止,而且實驗結果必須作廢,需重新進行實驗。所以發(fā)生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣,浪費人力物力。因此要避免污染,首先應是預防,而不是排除。

3.1、工作區(qū)域的嚴格劃分 

    1)各個實驗區(qū)域設置合理; 

    2)各個實驗區(qū)域要有明顯的標記(如醒目的門牌或不同的地面顏色等),以避免各個不同實驗區(qū)域設備物品、試劑等發(fā)生混淆。 

3.2、合理的系統(tǒng)設置 

   1)合理的空調通風系統(tǒng)設置,盡量采用全送全排的空調系統(tǒng); 

   2)嚴格的氣流壓力控制,保證不同的實驗區(qū)內不同的壓力要求。 

3.3、 規(guī)范的操作 

   1)擴增檢驗實驗室的技術人員必須進行上崗培訓,經培訓合格后才能從事臨床基因擴增檢驗的工作; 

   2)在實驗操作過程中,操作者必須戴手套,并經常更換。此外,操作中使用一次性帽子也是一個有效地防止污染的措施; 

   3)清潔工作及時、正確。實驗工作結束后,必須立即對本區(qū)進行清潔。除常規(guī)的消毒液體對表面進行擦拭消毒或紫外線燈的照射消毒外,對一些實驗設備還應進行高壓消毒處理。 

3.4、嚴格的管理 

   1)嚴格控制進出實驗室的人員。與實驗無關的人員不得隨意進出實驗室,有條件的情況下要設置獨立的通道和進出整個實驗區(qū)的門; 

   2)盡量減少在實驗區(qū)內不必要的走動以減少交叉污染的可能性。 

   3)擴增產物分析區(qū)是最主要的擴增產物污染來源,廢液不能在實驗室中傾倒,必須經消毒液浸泡消毒后在遠離實驗室的地方棄掉,用過的吸頭等一次性材料也應經消毒液浸泡消毒后統(tǒng)一處理,如焚燒等; 

   4)擴增產物分析區(qū)可能會用到某些可致基因突變和有毒物質,應特別注意實驗人員的安全防護。 

3.5、完備的實驗室配套設施 

    完備的實驗室配套設施是保證實驗工作的必要條件,應根據各個實驗室實驗內容的不同配備相應的設備和儀器,如超凈工作臺、離心機、加樣器等。

 

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